A voges-proscauer reakció alkalmazása az enterobaktériumok mikrobiológiai differenciálódására

A Voges-Proskauer reakció különleges helyet foglal el az enterobaktériumok és néhány vibrion differenciális meghatározásában. A teszt azon alapul, hogy a baktériumok képesek erjeszteni a glükózt, hogy acetoint képezzenek.

A kutatási folyamat lényege

A mikrobiológiában a Voges-Proskauer reakciót gyakran használják a Yersinia enterobaktériumok (beleértve a pseudotuberculosis és enterocolites kórokozóit), az E. coli, a spóraképző aerobok családján belüli megkülönböztetésre. Az eredmény láthatóvá válik a közeg színezése miatt bizonyos reagensek hozzáadásával.

Ez a teszt az IMViC sorozathoz tartozik (rövidítés Indol, Metilvörös, Voges-Proskauer I citrát) - az azonosítási tesztek egy csoportja, amely differenciális definíciókat tartalmaz:

• a triptofán indolra történő hasításán alapuló indollal, Kovacs vagy Ehrlich reagens jelenlétében használják;
• metilroth vagy metilvörös alkalmazásával egy adott pH kimutatása a glükóz metabolizmus eredményeként;
• Voges-Proscauer reakciók az acetil-metilkarbinol kimutatására;
• a citrát felhasználása színváltozás a táptalaj lúgosításának eredményeként.

A folyamat lényege a diagnosztizált baktériumok jelenlétének vizualizálása az általuk alkotott acetoin kölcsönhatása miatt maró káliummal oxigén jelenlétében. Az acetil-metil-karbinol diacetilre oxidálódik, amely élénkvörös vagy rózsaszín színű vegyületet képez. A vizsgálat érzékenységét növeli az alfa-naftol bevezetése a maró kálium bevezetése előtt.

A teszt beállítása

A Voges-Proskauer reakció megfogalmazása magában foglalja a mikroorganizmusok előzetes tenyésztését. A tiszta kultúrát Clark differenciáldiagnosztikai közegére vetik, amelynek változata Clark húslevese (agar-agar hozzáadása nélkül). Vagy kész táptalajt, vagy saját készítésű táptalajt használnak. A kompozíció a következőket tartalmazza:

• 5 g pepton;
• 5 g glükóz;
• 5 g kálium-dinbázisos foszfát;
• 1 l párlat.

A vizsgálat során a tenyészetet steril bakteriológiai hurokkal folyékony közegbe vetjük. Mennyiség - 5 ml egy kémcsőben plusz kontroll. Az inkubációt 35-37 fokos hőmérsékleten végezzük két napig. Ezután a Voges-Proskauer reakciót szakaszokban vizsgáljuk:

1. 2,5 ml tenyészetet a húslevesben egy steril kémcsőbe viszünk át.
2. Adjunk hozzá hat csepp alfa-naftolt (5% - os alkoholos oldat).
3. Adjunk hozzá 40% - os maró kálium-oldatot 0,1 ml vagy két csepp mennyiségben.
4. A keverést a kémcső óvatos rázásával végezzük.
5. Az eredményt a kísérlet kezdetétől számított 15 perc elteltével értékeljük.

A vizsgálat elvégzésének alternatív módja az éjszakai inkubáció, amelynek időtartama 18 órára vagy egy napra csökken. Ezen módszer mellett expressz tesztet is alkalmaznak: tenyészetet viszünk be egy hurokba 2 ml közegben, körülbelül négy órán át inkubáljuk, majd reagenseket adunk hozzá egyenlő mennyiségű 2-3 cseppben, összekeverjük, és az eredményt tíz perc alatt értékeljük.

A kontroll a tüdőgyulladás egyik kórokozója Klebsiella pneumoniae-ATCC 13883 törzs.

Az eredmény értékelése

Miután a reagensek hozzáadása után eltelt a szükséges idő (5-15 perc), cseresznyevörös színt kell megfigyelni kifejezett pozitív reakcióval, piros és rózsaszín-gyenge pozitív reakcióval. A változások hiányát negatív eredményként regisztrálják.

Az oldatban lévő maró kálium feleslege pozitív reakciót utánozhat, ha réz színnel színezi. Ebben az esetben a vizsgált kolónia negatív válaszát fel kell jegyezni. A rézfestés olyan esetekben is megjelenik, amikor az értékelést egy órával a reagensek bevezetése után adják meg.

Az eredmény értékelésekor figyelembe kell venni, hogy a vizsgált mikroorganizmusok hosszan tartó tenyésztése (három nap alatt) a táptalaj savasodásához vezet, ami a vizsgálat helytelen eredményéhez vezethet. A reakció gyengén kifejezhető pozitív vagy hamis negatív.

A vizsgálat reagenseire vonatkozó követelmények

A Voges-Proskauer reakció reagenseinek meg kell felelniük a következő követelményeknek, mivel a helyes koncentráció, magas fokú tisztítás és stabilitás, amelyet a tárolási szabályok betartásával érnek el.

A kész tesztkészletek általában 100 vagy annál több alkalmazáshoz tartalmaznak reagenseket, műanyag vagy sötétített injekciós üvegben vannak. A minőség szabályozott a vonatkozó dokumentáció szerint.